反转录PCR/荧光定量PCR

RT-PCR/Real time-PCR

RT-PCR 是将 RNA 的反转录（RT）和 cDNA 的扩增（PCR）相结合的技术。首先经反转录酶的作用从 RNA 合成 cDNA，再以 cDNA 为模板，扩增合成目的片段。荧光定量 PCR 是指在 PCR 反应体系中加入荧光基团（如 SYBR 荧光染料），利用荧光信号积累实时监测整个 PCR 进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

服务流程 

1. 从样本中提取总 RNA 

2. 引物/探针设计及合成

3. 合成 cDNA 第一链

4. 以 cDNA 为模版，分别扩增目的基因和内参基因

5. 定性：PCR 产物的凝胶电泳和差异分析

荧光定量：构建标准品的标准曲线，溶解曲线，扩增曲线，计算各样本的拷贝数。

备注：请提供足够量的样品（100mg 组织块或 107 个细胞或 0.5ml 血清），动物组织、植物组织等取样后需液氮速冻；细菌、细胞样品需新鲜培养。

提供结果

1. 总 RNA 的质量（电泳图片 28S/18S ，A260/A280）

2. 定性：PCR 产物电泳图片，半定量结果分析

定量：目的基因和内参基因的溶解曲线图、扩增曲线图，ct 值，相对表达量

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