质粒载体的基本介绍

质粒是小型环状DNA分子，在基因工程中作为最常用，最简单的载体，必须包括三部分：遗传标记基因，复制区，目的基因。 质粒在所有的细菌类群中都可发现，它们是独立于细菌染色体外自我复制的DNA分子。

自然界中，质粒是在营养充足时出现的，它在结构、大小、复制方式，每个细菌的拷贝数，在不同的细菌体内的繁殖力不同，在菌种之间的转移力等方面都会变化，可能最重要的是质粒所携带的特征的改变。大多数原核生物的质粒是双链环状的DNA分子；但是无论是在革兰氏阳性还是阴性菌体内都可以发现线状质粒。质粒大小变化很大，可从几个到数百个kb。

质粒依靠宿主细胞提供的蛋白质进行复制，但也可以使宿主细胞获得质粒编码的功能。质粒复制可以与细菌的细胞周期同步，导致菌体内质粒的拷贝数较低，质粒复制也可独立于细胞周期，使每个菌体内扩增了成百上千个质粒拷贝。一些质粒在菌种间可自由地转移它们的DNA分子，另一些只转移质粒给同种细菌，而有些却根本不转移它们的DNA。

质粒带有具有许多功能的基因，这些功能包括对抗生素和重金属的抗性、对诱变原的敏感性、对噬菌体的易感或抗性、产生限制酶、产生稀有的氨基酸和毒素、决定毒力、降解复杂有机分子，以及形成共生关系的能力和在生物界内转移DNA的能力。

质粒载体具备的条件

质粒载体绝大多数是以天然质粒为基础,加以人工改造和组建。理想的细菌质粒载体,除去其他类型载体相同的特点外,还应具备以下条件：

①相对分子质量尽可能小,质粒越小,拷贝数越高,而且便于提取和纯化；

②DNA结构和功能清楚,质粒序列中具有包含一系列单一限制酶酶切位点的多克隆位点,便于带有不同末端的外源片段的插入；

③具有在宿主中合适的一个或多个选择标记,用以筛选携带有目的片段的克隆,这类选择标记可以分为显性标记和营养缺陷型标记,最主要的显性标记是各种抗生素抗性基因(如氨苄青霉素抗性基因、四环素抗性基因、阿泊拉霉素抗性基因、氯霉素抗性基因等)；

④缺失流动基因,这样质粒就不会从一个细菌接触转移到另一个细菌。

常用的质粒载体

载体种类：质粒、噬菌体、腺病毒载体、逆转录病毒载体

质粒特点：

存在于细菌染色体外的小型环状DNA分子。

具有自我复制功能。

带有抗性基因及表型识别等遗传性标记物。

经改造后具有多克隆位点。

举例：pMD-18T质粒、pUCl9质粒、pBR322质粒等