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发布日期:2024/10/11 8:56:00

琼脂糖凝胶电泳鉴定质粒DNA

琼脂糖凝胶电泳是分离鉴定和纯化DNA片段的常用方法。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应,DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷,在电场中向正极移动。

由于糖磷酸骨架在结构上的重复性质,相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷,因此它们能以同样的速度向正极方向移动。
不同浓度琼脂糖凝胶可以分离从200bp至50kb的DNA片段。在琼脂糖溶液中加入低浓度的溴化乙锭(ethidum bromide ,EB),在紫外光下可以检出 10ng的DNA条带,在电场中,pH8.0条件下,凝胶中带负电荷的DNA向阳极迁移。

质粒DNA提取方法
1,碱裂解法
2,煮沸裂解
3,羟基磷灰石柱层析法
4,质粒DNA释放法
5,酸酚法等。

选择哪一种方法取决于以下几个因素
1,质粒的大小
2,大肠杆菌菌株
3,裂解后用于纯化的技术和实验要求
 

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