在部分实验室,由于血清和培养条件等差异,转染后镜下培养基中可能出现少量黑点状沉淀,为转染试剂和血清中蛋白结合产物,不影响转染结果和细胞状态,可通过换液除去。
无血清培养基,顾名思义,就是在细胞培养中不需要添加血清,但是在某些应用中可能要添加生长因子或细胞因子。无血清培养基中添加了血清的主要成分:粘附因子、生长因子、必需的营养物质和激素等,能减少血清带来的不利因素,使细胞培养的条件更稳定。经历了天然培养基、合成培养基后,无血清培养基和无血清培养成为当今细胞培养领域的一大趋势。采用无血清培养可简化纯化和鉴定各种细胞产物的程序,避免病毒污染造成的危害。
常用的有PDA培养基、孟加拉红培养基、高盐察氏培养基、酵母粉葡萄糖氯霉素琼脂等等。培养7天后如果菌落长毛的就是霉菌,没有毛的就是酵母菌,形态可能会不一样,因为酵母菌不止一种,不同的酵母菌长出来的形态会不一样。
泛素化是指泛素分子在一系列酶的作用下共价结合到靶蛋白上的过程。这个过程涉及三种关键酶:E1泛素激活酶、E2泛素结合酶和E3泛素连接酶。首先,E1在ATP供能下激活泛素分子,然后将其转移到E2上,最后E3识别并结合特定的底物蛋白,催化泛素从E2转移到底物蛋白的赖氨酸残基上,形成异肽键,完成泛素化修饰。