ELISA是一种快速、灵敏、准确可靠的一种定量分析方法,样本的处理对于实验的成功有着举足轻重的作用。 利用进行检测的样本类型包括常见的血液(血清、血浆),组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清以及不常见的皮肤组织、尿液、粪便、肺泡灌洗液、唾液、脑脊液、胸腹水、前列腺液、精液、阴道分泌物等,这些样本收集的时间、处理方法和保存都会影响到实验的结果。
染色时调节pH值很重要。如果组织块在福尔马林中固定时间长,组织酸化而影响细胞核着色。因此,要在自来水中冲洗时间长一些或在饱和碳酸锂水溶液中处理10-30min,这样可以使细胞核着色较深。染伊红时胞浆着色不佳,可在伊红溶液中滴加1-2滴冰醋酸。
细胞死亡是所有生物的基本过程,通过不同的机制发生。程序性细胞死亡的三种主要类型是凋亡、焦亡和坏死,每一种途径都使用复杂的分子和细胞机制。尽管每种途径都有特定的机制和结果,但它们具有共同的组成部分和特征。
WB实验中使用到的有三种抗体:一抗、二抗和内参抗体。一抗是唯一针对目标抗原的抗体,可以进行制备也可以购买现货,难度系数较高;二抗直接买就OK,只是需要留意下种属选择;内参抗体必不可少,是WB实验中的质控环节。
抗体和重组蛋白无论是保存还是运输,请避免反复冻融。反复冻融,冰晶会破坏抗体和重组蛋白的空间结构,导致蛋白变性形成多聚体和重组蛋白构象改变,从而降低抗体的结合能力,也加快了抗体球蛋白和重组蛋白的降解速度。抗体和重组蛋白保存得当与否,直接决定了抗体和重组蛋白的活性使用效果,如果保存得当,抗体和重组蛋白活性大部分都可以维持数年。
PBS缓冲液是一种广泛应用于生物化学实验中的缓冲溶液,它的全称是Phosphate Buffer Saline (PB),中文通常称为"磷酸盐缓冲盐溶液"或者"磷酸盐缓冲生理盐水"。这种溶液之所以能够保持稳定的pH值,主要得益于其中的磷酸缓冲对(H2PO4-和HPO42-)。
白细胞介素,简称白介素,是指在白细胞或免疫细胞间相互作用的淋巴因子,它和血细胞生长因子同属细胞因子。两者相互协调,相互作用,共同完成造血和免疫调节功能。白细胞介素在传递信息,激活与调节免疫细胞,介导T、B细胞活化、增殖与分化及在炎症反应中起重要作用。
流式细胞术广泛应用于细胞表面和细胞内分子表达特征的分析,界定不同种类的细胞群,测定分离出的亚类纯度,分析细胞的大小和总量,它可以同时分析单个细胞的多个参数。它主要用于检测标记在抗体上的荧光强度,这些荧光抗体则可以检测与特定细胞分子结合的蛋白或配体,如与 DNA 结合的溴化丙啶 (PI) 等。