常细胞生长得非常快时,pH值通常下降得很快。此时可以及时传代、提高传代比例或降低血清量等方法进行解决。此外,培养瓶盖拧得太紧、NaHCO3 缓冲系统缓冲能力不够、培养液中盐浓度不正确、细菌、酵母或真菌污染等也能导致pH值通常下降得很快。
通常细胞体外培养时需要加入血清,以维持细胞的生长和存活。而除了血清之外,部分细胞在培养过程中需要添加胰岛素和β-巯基乙醇等成分来维持细胞状态。MCF-7和NIH:OVCAR-3等细胞需要额外添加胰岛素,而Thp-1和MC3T3-E1 subclone 14等细胞则需要添加β-巯基乙醇,不同细胞加入量会有差异,需根据细胞类型判断。
常规的PCR需要专门制备DNA模板,面菌落PCR可直接以单个菌落作为模板,用无菌牙挑取单个菌落到TE级冲液中,煮沸10mn,涡旋振荡后短暂离心,用1-2pl裂解液作为DNA模板,省去抽提模板DNA这一步,通过特异性引物或通用引物对目的基因进行快速扩增大大节约了时间和成本
操作中必须有“无菌操作”的概念,所用玻璃器皿必须是完全灭菌的,不得残留有细菌或抑菌物质。所用剪刀、镊子等器具也必须进行消毒处理。样品如果有包装,应用75%乙醇在包装开口处擦拭后取样。操作应当在超净工作台或经过消毒处理的无菌室进行。琼脂平板在工作台暴露15分钟,每个平板不得超过15个菌落。
稳定细胞系是指将外源基因整合到宿主细胞基因组中,使外源基因能够在宿主细胞中长期稳定表达,这样的细胞系称为稳定细胞系。其原理是将外源基因克隆到具有某种抗性的载体上,通过转染宿主细胞,外源基因整合到宿主染色体上,用载体中所含抗性基因进行筛选即可得到成功整合目的基因的细胞。
冷冻切片技术,是一种在低温条件下使组织快速冷冻到一定的硬度,然后进行切片的一种方法。被称为病理科的急诊工作----在外科手术过程中,医生切取部分肿瘤组织或其它病变标本,送检到病理科通过快速冷冻标本制作切片,病理科诊断医师对该切片进行观察快速做出判断得出良、恶性结果或某种疾病的诊断。
牛源血清又分为胎牛血清、新生牛血清和小牛血清,它们的区别方式主要由于牛龄和采血方式不同,其中胎牛血清因其抗体水平含量低对后续实验结果影响小、生长因子含量水平高利于细胞增殖而应用最广。