电泳过程至关重要,稍有不慎我们就只能对着 「微笑线」和 「皱眉线」 叹气,而质量好的电泳能让目的条带整齐,结果图让人眼前一亮。电泳的支持介质为聚丙烯酰胺凝胶,该凝胶的聚合则由丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺单体在自由基的催化下完成。
细胞爬片是一种将细胞培养在玻璃或塑料表面上,使其附着并扩展的技术。这种技术可以用于观察细胞形态、细胞运动、细胞-细胞相互作用等。我们在做免疫荧光(IF),激光共聚焦(Confocal),凋亡检测(TUNEL)时,免不了要制备细胞爬片,爬片质量完全决定了最后拍照的质量以及实验数据的精准性。
细胞裂解成分一般使用的是表面活性剂,常用的有曲拉通X-100(Triton X-100)、脱氧胆(deoxycholate)、乙基苯基聚乙二醇(Nonidet P40,NP-40)、十二烷基磺酸钠(SDS)。其中Triton X-100和NP-40为非离子型,deoxycholate和SDS为离子型。不同裂解成分的裂解强度不同,一般来说Triton X-100和SDS的裂解能力较强,deoxycholate和NP-40的裂解效果较为温和,可以根据不同的实验需求选用不同的裂解液。
标准品是标记免疫分析定量的依据。标准品的正确与否直接影响样品的测定结果。如果在连续测定中,或各实验室之间使用的标准品不一致,则可影响到实验结果的可比性。为此,对标记免疫分析所使用的标准品应满足如下要求。